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          kamiyabiomedical KT-470

          • 型   號:
          • 時   間:2019-04-16
          • 價   格:

          kamiyabiomedical KT-470
          小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯免疫吸附試驗
          Mouse Cardiac Troponin-I ELISA
          用于小鼠血漿肌鈣蛋白I的定量測定。
          貨號 KT-470
          僅供研究使用
          產品
          K-分析小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯免疫吸附試驗是一種酶免疫分析法,用于定量測定心肌
          小鼠血漿肌鈣蛋白-I。僅供研究使用。

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          kamiyabiomedical KT-470說明書

          小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯免疫吸附試驗

          Mouse Cardiac Troponin-I ELISA

          用于小鼠血漿肌鈣蛋白I的定量測定。
          貨號 KT-470
          僅供研究使用

          kamiyabiomedical KT-470產品
          K-分析小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯免疫吸附試驗是一種酶免疫分析法,用于定量測定心肌
          小鼠血漿肌鈣蛋白-I。僅供研究使用。

           ?
          介紹
          心肌肌鈣蛋白-I(ctni)是調節肌肉收縮的肌鈣蛋白復合物的組成部分。心臟損傷后,CTNI
          被釋放到血液中。因為它在心臟中有特殊的表達,所以它是心臟損傷的一個極好的生物標志物。在
          人CTNI水平在受傷后12-24小時達到峰值,2-6天內恢復到基線水平。在小鼠中,水平早在1
          1-3天內恢復正常。
          原理
          本試驗用于血漿樣品。酶聯免疫吸附試驗使用兩種不同的抗體,它們識別相對
          CTNI上的蛋白酶抗性表位。一種用于固相固定(微量滴定井)。第二個是共軛的
          對辣根過氧化物酶(HRP)進行檢測。首先用三體積的血漿稀釋血漿樣品。
          稀釋劑。然后將校準器和稀釋樣品與HRP共軛物在微量滴定池中培養1小時。這個
          結果CTNI分子夾在固定和檢測抗體之間。洗井到
          去除未結合的HRP共軛物。加入TMB,孵育20分鐘。如果存在CTNI,則形成藍色。顏色
          通過添加停止溶液停止顯影,將顏色變為黃色,并在450 nm處測量吸光度。
          CTNI的濃度與吸光度成正比,由校準曲線得出。
          組件
          •防CTNI涂層板(12 x 8孔條)
          •CTNI庫存校準器(凍干)
          •校準器稀釋劑,25毫升
          •血漿稀釋劑,25 ml
          •HRP共軛物,11 ml
          •20倍洗滌液,50毫升
          •TMB溶液,11毫升
          •停止溶液,11毫升

          所需但未提供的材料
          •移液器和吸管頭
          •蒸餾水或去離子水
          •聚丙烯或玻璃管
          •渦流攪拌機
          •吸水紙或紙巾
          •培養皿/搖床
          •板墊圈
          •能夠測量450 nm吸光度的讀板器。
          •曲線擬合軟件
          洗滌液準備
          洗滌液作為20倍的儲備提供。使用前,用950毫升蒸餾水稀釋瓶子(50毫升)的內容物。
          或去離子水。
          校準器準備
          1。按照小瓶標簽上的詳細說明,用去離子水或蒸餾水重新配制凍干的CTNI儲備。輕輕攪拌直到溶解的
          2。將7根聚丙烯管標記為10、5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 ng/ml。
          三。在標記為10 ng/ml的試管中,移液管446.1微升校準稀釋液。然后加入53.9μl的原料,輕輕攪拌。這個
          提供10 ng/ml校準儀。
          4。用移液管將250微升校準稀釋液移入標有5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 ng/ml的試管中。
          5。通過將250μl的10 ng/ml校準器與250μl的稀釋劑在管中稀釋和混合,制備5 ng/ml校準器。
          標記為5 ng/ml。同樣,通過兩倍串聯稀釋準備剩余的校準儀。
          重組后的CTNI儲備應在使用后立即冷凍。冷凍時保持穩定或至少1
          -20°C時為一個月,-70°C時為6個月。使用后丟棄工作校準儀。
          樣品采集與制備
          血漿(EDTA、檸檬酸鹽或肝素)應在血液采集后盡快制備,并在4°C下保存。
          應同樣處理樣品(即所有樣品的儲存時間和溫度應相同)。中頻等離子體
          樣品不能在采集后4小時內進行分析,應在-70°C下冷凍,使用前僅解凍一次。
          我們建議對樣品進行一式兩份的分析。分析前,血漿樣品應稀釋四倍
          血漿稀釋劑。這可以很容易地通過將100μl的每個血漿樣品與300μl的血漿稀釋劑混合
          聚丙烯微型離心管。
          一般說明
          1。所有試劑在使用前應達到室溫。
          2。解凍后,校準器稀釋劑中可能會出現沉淀物。應通過離心法去除沉淀物。
          在臺式離心機中以約3000轉/分的轉速運行5分鐘。使用干凈的上清液。
          三。在完全理解
          指導并遵守良好的實驗室慣例。
          4。清洗程序至關重要。洗滌不足將導致精度差和吸光度讀數錯誤升高。
          5。實驗室溫度會影響吸光度讀數。我們的酶聯免疫吸附測定試劑盒是用設置在
          150轉/分和25°C。在較低溫度下進行分析會導致吸光度值較低。

          測定程序
          1。將所需數量的8孔條固定在支架中。未使用的板條應存放在重新密封的袋子中
          4°C的干燥劑,以備將來使用。
          2。在每個孔中添加100μl的HRP共軛物。
          三。向井中注入100微升校準儀和稀釋樣品(我們建議校準儀和樣品試運行
          復制品)。
          4。在150轉/分和25°C的搖板機上培養1小時。
          5。使用平板墊圈(400μl/孔)排空并用1X洗滌液清洗5個微量滴度孔。
          6。在吸水紙或紙巾上用力敲打油井,清除所有殘留的液滴。
          7。向每個孔中分配100μl TMB。
          8。在150轉/分和25°C的軌道式微型平板振動篩上培養20分鐘。
          9。20分鐘后,通過向每個孔中添加100μl的停止溶液來停止反應。
          10。輕輕混合。務必確保所有藍色變為黃色。
          11。在5分鐘內用平板閱讀器讀取450納米的吸光度。
          計算結果
          1。使用曲線擬合軟件,通過繪制校準器的吸光度值與對數10的關系來構建校準曲線。
          濃度。
          2。將校準曲線擬合為四參數邏輯回歸(4pl)方程(x軸=log10濃度),并確定
          樣品的濃度(導出反對數)。
          三。將導出濃度乘以稀釋系數,以確定原始樣品中的實際濃度。
          4。如果A450值超出校準曲線,應適當稀釋樣品并重新測試。如果進一步稀釋
          需要時,新鮮解凍的血漿樣品應先用三體積的血漿稀釋劑(4倍稀釋)稀釋。這個
          然后用校準器稀釋劑稀釋所得混合物。
          典型校準曲線
          典型的校準曲線如下所示。這只是為了說明。必須為每個實驗生成校準曲線。

          存儲
          將凍干后的原料儲存在-20°C或以下。試劑盒的剩余部分應儲存在4°C,微量滴定板應
          放在裝有干燥劑的密封袋中。自購買之日起,套件將保持穩定6個月。

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